Лабораторія клітинних та тканинних культур

Фенотипування та сортування клітин
на проточному цитофлюориметрі-сортері BD FACSAria

Завідувач відділу клітинних та тканинних технологій,
доктор медичних наук
Кирик Віталій Михайлович 

e-mail: labcellculture[a]gmail.com

Лазерний проточний цитофлюориметр-сортер FACSArіa виробництва компанії Becton Dіckіnson є одним з найбільш високотехнологічних та універсальних приладів, що може бути використаний і як цитометр-аналізатор, і як повноцінний сортер клітин.

Проточний цитофлуориметр BD FACSArіa підтримує мультипараметричний аналіз із одночасною реєстрацією 11 параметрів в одній пробі - 2 параметри світлорозсіювання і до 9 параметрів флуоресценції.

Конфігурація приладу: 3-лазерна, 9 детекторів флюоресценції та детектори прямого і бокового світлорозсіювання:
- 488 нм (блакитний) напівпровідниковий лазер Coherent Sapphire з системою детекторів BD Octagon™: детектор бокового світлорозсіювання та 5 детекторів флюоресценції, 
- 633 нм (червоний) гелій-неоновий лазер JDS Uniphase HeNe з системою детекторів BD Trigon™: 2 детектори флюоресценції
- 407 нм (фіолетовий) твердотільний лазер Point Source Violet з системою детекторів BD Trigon™: 2 детектори флюоресценції
Детальніше про конфігурацію детекторів та вибір флюорохромів...

Встановлені модулі:
Система Warming/Cooling - water recirculation unit для підтримання температури сортованого матеріалу
ACDU – advanced cell deposition unit для сортування в культуральні планшети

Сортер BD FACSArіa володіє рядом унікальних технічних характеристик, що виділяють його серед інших приладів з подібними функціями.
Детальніше про характеристики приладу...

Можливості застосування цитофлюориметра-сортера FACSArіa

 Області досліджень

Основні методики

- імунофенотипування клітин за поверхневими маркерами 

• абсолютна та відносна кількість субпопуляцій лімфоцитів периферичної крові (T-, B-, NK)
• абсолютна та відносна кількість стовбурових клітин периферичної крові, аспірату кісткового мозку, кордової крові, фетальної печінки, ліпоаспірату
• клональність TCR при Т-клітинних лімфопроліферативних захворюваннях
• імунофенотипічна характеристика культур мезенхімальних мультипотентних стовбурових клітин кісткового мозку, жирової тканини, пуповини
• імунофенотипічна характеристика культур кератиноцитів, меланоцитів, ендотеліоцитів, мієлоїдних прогеніторів і дендритних клітин, пухлин
• експресія молекул адгезії
• алергопроби in vitro по активації базофілів
• фенотипування за HLA
• субпопуляції тимоцитів, спленоцитів лабораторних тварин
• активність фагоцитозу
• функціональна активність тромбоцитів
• аналіз ретикулоцитів

- аналіз ДНК і РНК

• відсоток загиблих клітин в матеріалі
• рівень цитотоксичності та мультирезистентності по відсотку загиблих клітин при спільному культивуванні з NK або препаратами
• кінетика клітинного циклу в умовах активації, впливу препаратів, при пухлинному рості
• апоптоз
• фрагменти ДНК
• міжнуклеосомальна деградація ДНК
• синтез і розпад ДНК та РНК (каспази)
• аналіз репортерів генів (FACS Gal, GFP)
• кількість ДНК (плоїдність)
• довжина теломер
• аналіз siRNA
  

 - аналіз внутрішньоклітинних процесів

• внутрішньоклітинні маркери (Toll-Like-рецептори)
• мембранний потенціал плазматичної та мітохондріальної мембран
• транспорт кальцію, магнію
• внутрішньоклітинний рН
• окисно-відновні процеси: супероксид, пероксид водню, оксид азоту
• фосфорилювання внутрішньоклітинних протеїнів
• транскрипційні фактори і сигнальні молекули (STAT) 
• рівень внутрішньоклітинної продукції цитокінів, антитіл: IFN, IL, TNF
• активність ферментів, лізосомальних протеїназ
• пероксидація ліпідів
• внутрішньоклітинні пігменти: хлорофіл, фікоеритрин
• рівень глутатіону
• функція мітохондрій, ендоплазматичного ретикулюма, ендосом, апарату Гольжі
  

- аналіз розчинених продуктів в біологічних рідинах, кондиційному середовищі

• рівень імуноглобулінів
• цитокіни
• ростові фактори
• ферменти
• гормони

- сортування клітин

• для наступного аналізу певної популяції (молекулярно-генетичні дослідження, протеоміка)
• для культивування в експерименті
• для трансплантації в експерименті
• отримання моноклональних культур
• сортування сперматозоїдів
  
  

 Приклад фенотипування субпопуляцій гемопоетичних стовбурових клітин кісткового мозку
 з одночасним використанням панелі антитіл Lin, c-kit, Sca-1, CD150 та flt3

 
 
Приклади фенотипування субпопуляцій лімфоцитів периферичної крові
з використанням панелі антитіл CD3, CD4, CD8 та CD3, CD16-56, CD19